English
Español
Português
العربية
한국어
日本語
Français
Deutsch
ภาษาไทย
Что вы знаете об обнаружении нуклеиновых кислот?
С момента вспышки COVID-19 слово «тестирование нуклеиновых кислот» стало часто употребляемым словом. Положительный тест на нуклеиновую кислоту является важным критерием диагностики COVID-19. WST-8 стал API для наборов для тестирования нуклеиновых кислот. Что вы знаете о тестировании нуклеиновых кислот? В чем заключается принцип обнаружения нуклеиновых кислот? Почему тесты на нуклеиновые кислоты дают ложноотрицательные результаты? Какие еще технологии, помимо тестирования нуклеиновых кислот, могут обнаружить новый коронавирус?
Демистификация принципа обнаружения нуклеиновых кислот нового коронавируса
Тестирование нуклеиновых кислот на самом деле предназначено для определения наличия нуклеиновой кислоты (РНК) нового коронавируса в организме испытуемого. Нуклеиновая кислота каждого вируса содержит рибонуклеотиды, причем количество и порядок рибонуклеотидов, содержащихся в разных вирусах, различны, что делает каждый вирус специфичным.
Нуклеиновая кислота нового коронавируса также уникальна, и обнаружение нуклеиновой кислоты — это специфическое обнаружение нуклеиновой кислоты нового коронавируса. Перед тестированием нуклеиновых кислот необходимо собрать образцы мокроты субъекта, мазка из зева, жидкости бронхоальвеолярного лаважа, крови и т. д., и путем тестирования этих образцов можно обнаружить, что дыхательные пути субъекта инфицированы бактериями. Обнаружение нуклеиновой кислоты нового коронавируса обычно используется для обнаружения образцов мазков из зева. Образец расщепляется и очищается, из него извлекается возможная новая нуклеиновая кислота коронавируса и препараты для теста готовы.
Для обнаружения нуклеиновых кислот нового коронавируса в основном используется технология флуоресцентной количественной RT-PCR, которая представляет собой комбинацию технологии флуоресцентной количественной ПЦР и технологии RT-PCR. В процессе обнаружения используется технология RT-PCR для обратной транскрипции нуклеиновой кислоты (РНК) нового коронавируса в соответствующую дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК); затем используется технология флуоресцентной количественной ПЦР для репликации полученной ДНК в больших количествах. Реплицированная ДНК обнаруживается и метится с помощью полового зонда. Если есть новая нуклеиновая кислота коронавируса, прибор может обнаружить флуоресцентный сигнал, и, поскольку ДНК продолжает реплицироваться, флуоресцентный сигнал продолжает усиливаться, таким образом косвенно обнаруживая присутствие нового коронавируса.
Почему возникают ложноотрицательные результаты?
Ложноотрицательный результат означает, что тестируемый человек инфицирован новым коронавирусом, но нуклеиновая кислота вируса не обнаружена, то есть тест на нуклеиновую кислоту отрицательный. Если у субъекта нет соответствующих симптомов и тест на нуклеиновую кислоту отрицательный, легко позволить ему ослабить бдительность, что может привести к более широкому распространению вируса, что также является коварством нового коронавируса.
Существует три основные причины ложноотрицательных результатов:
Во-первых, содержание нуклеиновой кислоты нового коронавируса в исходном тестовом образце слишком низкое, ниже нижнего предела обнаружения. Это зависит от типа собранной пробы и времени ее сбора.
Во-вторых, если сайт, где нуклеиновая кислота нового коронавируса связывается с зондом, мутирует, это может повлиять на эффективность связывания зонда при обнаружении, что приведет к необнаружимому флуоресцентному сигналу.
В-третьих, ложноотрицательные результаты также связаны с чувствительностью технологии обнаружения. На ранней стадии вспышки клинические наборы были недостаточно зрелыми, а их чувствительность не была достаточно высокой, и часто поступали сообщения о ложноотрицательных результатах. В дальнейшем, с улучшением технического уровня, точность обнаружения быстро возрастала, а количество ложноотрицательных результатов продолжало снижаться.
Является ли положительный тест на нуклеиновую кислоту диагнозом?
Положительный результат теста на нуклеиновую кислоту может подтвердить наличие вирусной нуклеиновой кислоты в верхних дыхательных путях субъекта, но его нельзя напрямую диагностировать как пациента с новой коронарной пневмонией. В случае положительного результата теста на нуклеиновую кислоту субъекту следует поставить дополнительный диагноз на основании эпидемиологического анамнеза. История контактов и т. д. могут быть диагностированы как подтвержденный случай.
Если у субъекта нет каких-либо соответствующих симптомов, его обычно диагностируют как бессимптомную инфекцию. Бессимптомные инфекции также заразны, а некоторые бессимптомные инфекции позже начали проявлять симптомы и стали подтвержденными пациентами.
Другие технологии для обнаружения нового коронавируса
Для субъектов выделение вируса из образца является наиболее авторитетным основанием для диагностики. Однако выделение вируса — относительно опасная операция, которую необходимо проводить в лаборатории с высоким уровнем защиты, трудоемкая и дорогостоящая. . В общемедицинских учреждениях такого состояния нет. Большинство из них будут использовать метод выявления наличия в крови вирусных антител, чтобы определить, заражен ли субъект вирусом. Таким способом проверяются гепатит В, СПИД и т. д.
Новый коронавирус также можно обнаружить с помощью этого иммунологического метода обнаружения. Перед лицом вторжения нового коронавируса организм человека будет «сопротивляться» и вырабатывать специфические антитела IgM и IgG (иммуноглобулин М и иммуноглобулин G). Если эти два специфических антитела обнаруживаются в крови испытуемого, это может указывать на то, что испытуемый заражен новым коронавирусом.
Как обнаружить антитела? Обычно используемым методом является хемилюминесцентный иммуноанализ, то есть использование хемилюминесцентных реагентов или специфических ферментов для мечения антител или антигенов, образование комплексов иммунной реакцией и последующее добавление люминесцентных реагентов после отмывания. Видоспецифические антитела, хемилюминесцентный прибор могут обнаружить люминесцентный сигнал. Этот хемилюминесцентный иммуноанализ является одним из наиболее совершенных методов иммуноанализа в настоящее время. Он обладает высокой чувствительностью, высокой специфичностью, широким диапазоном обнаружения и быстрыми результатами, но стоимость обнаружения высока.
Кроме того, поскольку организму человека требуется определенное время для выработки антител после заражения вирусом, его можно обнаружить только после выработки антител, что также приводит к плохой своевременности обнаружения антител. Для выработки антител требуется 2–3 недели после заражения, например гепатита В и СПИДа. Для выявления антител IgM требуется более 3 дней, а для выявления антител IgG после новой коронавирусной инфекции – более недели.
Поэтому, чтобы как можно скорее поймать хвост нового коронавируса, используется обнаружение большего количества нуклеиновых кислот, что позволяет обнаружить следы нового коронавируса раньше.
